Principle:
Protein concentrations were measured by the Red Pyrogallol Molybdate method (Watanabe et al., 1986) using the SopaChem kit (Sopar-Biochem, Brussel, Belgium). Unknown protein concentrations were calculated from the absorption at 598 nm of a 1 mg/ml albumin/globulin standard (Sopar-Biochem).
Protocol
Bereid eiwitlysaat
Breng 2X50 µl buffer in twee cuvetten (= nul-waarde voor calibratiecurve)
Breng 2X50 µl standaard eiwitmengsel van gekende eiwitconcentratie (0,2 mg/ml) in twee cuvetten (= tweede punt van calibratiecurve)
Breng van elk staal in tweevoud 50 µl (ongekende eiwitconcentratie) in cuvetten
Voeg aan elke cuvet 1,5 ml reagens toe
Incubeer 10 min op kamertemperatuur
Meet de optische densiteit bij 598(±10) nm binnen de 30 min
Berekeningen :
O.D.onbekende - O.D.blanco
[onbekende] = 0,2 X -------------------- (mg/ml)
O.D.standaard - O.D.blanco
benodigdheden
cuvetten (2 per staal - metingen in tweevoud)
SopaChem reagens
standaard eiwitmengsel (Sopachem)