Preparation of electrocompetente cells (Tung & Chow)

Tung & Chow (1995). TIG 11(4), 128

1. Inoculeer 100 ml LB-medium met 1 ml van een overnacht opgegroeide E. coli cultuur
   Incubeer op 37°C tot een OD₆₀₀ ¸ 0,6
2. Koel de celcultuur 30 min op ijs
3. Oogst de cellen (4000.g - 15 min - 4°C)
4. Was de celpellet twee maal met 50 ml ijskoude 10 % glycerol
5. Resuspendeer de cellen in een eindvolume van 0,2 ml ijskoud GYT-medium
6. Stockeer in aliquots bij -70°C

4 ml LB-medium (voor precultuur)

100 ml LB-medium

0,2 ml GYT-medium
10 % glycerol
0,125 % gistextract
0,25 % trypton

100 ml 10 % glycerol

Hoofdmenu | LoGT | Rob Lavigne