Transformation of E. coli (Ausubel et al.) - fast protocol

Short Protocols in molecular Biology
Second Ed.
Edited by F.M. Ausubel, R. Brent, R.E. Kingston, D.D. Moore, J.G. Seidman, J.A.Smith and K. Struhl
Published by Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons, New York.

Dag 1 :

1. Groei overnacht een cultuur van de gewenste E. coli stam op in 4 ml LB

Dag 2

1. Verdun de overnacht opgegroeide cultuur 1/100 in LB medium en groei bij 37°C op tot een OD₆₀₀ van 0,3 à 0,4
2. Voeg een gelijk volume ijskoude 2x TSS buffer toe aan de celsuspentie en meng voorzichtig op ijs
3. Voeg 100 µl competente cellen toe aan 1 tot 5 µl DNA (0,1 tot 100 ng) in een ijskoude glazen proefbuis. Incubeer 5 tot 60 min op 4°C.
4. Voeg 0,9 ml LB medium/20 mM glucose toe en incubeer 30 tot 60 min op 37°C
5. Selecteer transformanten op geschikt selectief medium

IJskoude 2x transformatie- en stockeringsoplossing (TSS-buffer) :
Verdun steriel (geautoclaveerd) 40 % (w/v) polyethyleen glycol (PEG) 3350 tot 20 % PEG in steriel LB-medium, aangerijkt met 100 mM MgCl₂.
Voeg dimethyl sulfoxide (DMSO) toe tot 10 % en pas pH aan tot 6,5.

LB-medium, aangerijkt met 20 mM glucose

Hoofdmenu | LoGT | Rob Lavigne